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SAP-1CRISPR激活质粒(h) | sc-403868-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
ELK4 编码人类 ETS 结构域转录因子 SAP-1。SAP-1 是有丝分裂原激活信号通路的核内效应分子,可在血清反应元件(SRE)处与血清反应因子(SRF)协同作用,调控即刻早期基因程序。SAP-1 在 ERK/MAPK 级联通路下游被激活,帮助将细胞外生长因子信号与转录输出相连接,从而控制细胞增殖、分化以及应激反应相关基因的表达。作为三元复合体因子(TCF)家族成员之一,SAP-1 会影响与染色质相关的转录动态,并参与对细胞周期与生存通路的情境依赖性调控。ELK4/SAP-1 活性失调已被认为与致癌信号网络及异常转录状态有关,涉及肿瘤生物学和其他增殖性疾病。
SAP-1 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ELK4的表达。
SAP-1 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的ELK4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于ELK4转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性SAP-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的ELK4位点,并能够研究内源性位点上依赖于SAP-1的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ELK4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SAP-1通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。