SAMHD1CRISPR激活质粒(h): sc-406002-ACT

人源 SAMHD1（含 SAM 与 HD 结构域蛋白 1）是一种 dNTP 三磷酸水解酶，可调控细胞内脱氧核苷酸库，从而影响 DNA 复制的保真性、修复能力以及基因组稳定性。通过控制 dNTP 的可用性，SAMHD1 参与复制应激反应与 DNA 损伤信号通路，包括影响细胞周期进程及维持核苷酸稳态的相关过程。SAMHD1 还可在髓系细胞和静息 T 细胞中通过限制逆转录所需的 dNTP 底物来抑制逆转录病毒复制，因此与先天免疫调控相关。SAMHD1 的失调或突变与炎症及自身免疫表型有关，并在病毒—宿主相互作用以及癌症相关复制应激的研究中受到关注。

SAMHD1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SAMHD1的表达。

SAMHD1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SAMHD1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SAMHD1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性SAMHD1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SAMHD1位点，并能够研究内源性位点上依赖于SAMHD1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SAMHD1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟SAMHD1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。