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S-100PCRISPR激活质粒(h) | sc-404366-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 S100P 基因编码 S-100P,这是一种小型 EF-hand 钙结合蛋白,作为信号适配子将钙离子通量与细胞骨架动态、细胞周期调控以及应激响应型转录程序的变化连接起来。据报道,S-100P 可与 RAGE 等受体及信号枢纽相互作用,影响与 MAPK 和 NF-κB 相关的通路,从而调节细胞黏附、迁移与存活等表型。多种上皮来源恶性肿瘤中均观察到 S100P 表达失调,因此其常被研究作为肿瘤进展及转移潜能的标志物。此外,S-100P 的生物学功能也与炎症相关的组织重塑有关,此过程中钙依赖性信号与细胞外基质及免疫相关信号相互交织。
S-100P CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性S100P的表达。
S-100P CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的S100P基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于S100P转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性S-100P表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的S100P位点,并能够研究内源性位点上依赖于S-100P的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在S100P表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟S-100P通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。