Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
RYK CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-402654
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- RYK CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在RYK基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：RYK: sc-83082，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
RYK CRISPR/Cas9 KO质粒 (h) | sc-402654 | 20 µg | CNY2986.00 |
概述
RYK（受体样酪氨酸激酶）编码一种非典型的单次跨膜受体，其主要作为非经典 WNT 信号通路中的共受体发挥作用，包括由 WNT5A 驱动、调控细胞极性、定向迁移以及细胞骨架动态的相关通路。通过与 WNT 配体和 Frizzled 受体相互作用，RYK 可影响平面细胞极性，并调控 JNK 等下游效应因子，从而将细胞外信号与转录及形态发生程序连接起来。RYK 活性与神经发育和轴突导向有关；此外，在肿瘤细胞侵袭、与转移相关的表型以及炎症性微环境等情境中，也有关于 RYK/WNT 信号失衡的报道。这些特性使 RYK 成为在人类细胞模型中探究 WNT 信号、细胞黏附与迁移行为之间通路串扰的有用靶点。
RYK CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中RYK基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对RYK基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏RYK开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使RYK蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建RYK缺失的细胞模型，用于RYK信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 RYK 功能至关重要的 RYK 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 RYK 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 RYK CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 RYK CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 RYK 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 RYK HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 RYK HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由RYK同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定RYK靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。