robo1CRISPR激活质粒(h): sc-402263-ACT

ROBO1 编码 Roundabout 导向受体 1（robo1），这是一种与 SLIT 配体结合的跨膜受体，通过 SLIT–ROBO 信号通路调控轴突导向、神经元迁移以及组织模式形成。在人类细胞中，ROBO1 可通过下游 Rho 家族 GTP 酶通路影响细胞骨架动态与细胞运动性，从而作用于定向迁移、边界形成等过程。ROBO1 活性或表达失调与异常的发育信号以及改变的细胞侵袭程序有关，因此与神经发育机制和肿瘤生物学研究密切相关。ROBO1 也常被用作导向线索信号网络研究中的标志物和关键功能节点，用于探讨其与生长因子通路及黏附通路之间的串扰。

robo1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ROBO1的表达。

robo1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ROBO1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ROBO1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性robo1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ROBO1位点，并能够研究内源性位点上依赖于robo1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ROBO1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟robo1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。