The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
RNF149双切口酶质粒(m): sc-426694-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- RNF149 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- RNF149双切酶质粒（m）和RNF149双切酶质粒（m2）编码针对Rnf149的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
RNF149双切口酶质粒(m) | sc-426694-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Rnf149 基因编码 RNF149，这是一种 RING 指结构域的 E3 泛素连接酶，参与泛素依赖性的蛋白质降解周转以及细胞蛋白稳态（proteostasis）的调控。作为泛素–蛋白酶体系统调控的一部分，RNF149 与蛋白质质量控制、信号强度调节以及应激适应性反应等通路相关，这些过程共同塑造细胞的存活与稳态。泛素化程序的改变被广泛认为与疾病相关表型有关，包括生长调控失衡以及与神经退行性疾病相关的蛋白毒性应激，因此 RNF149 是开展机制研究的一个有用节点。对 RNF149 的功能解析有助于研究 E3 连接酶如何在哺乳动物细胞中微调底物稳定性及其下游通路输出。
RNF149 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Rnf149 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Rnf149内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Rnf149的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Rnf149基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。