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RIP140CRISPR激活质粒(h) | sc-401787-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
NRIP1 编码 RIP140,这是一种转录共调节因子,可通过与核受体及其他 DNA 结合型转录因子相互作用来调控基因表达,从而协调代谢与内分泌程序。RIP140 通过在靶启动子处塑造依赖染色质的转录激活或抑制,影响脂肪生成、线粒体功能、脂质与葡萄糖稳态以及炎症信号传导。通过与雌激素受体信号、PPAR 依赖性转录以及更广泛的共激活子/共抑制子网络等通路的串扰,RIP140 有助于将营养信号与细胞分化和应激反应整合起来。文献报道 NRIP1/RIP140 活性失调与代谢功能障碍、生殖相关表型以及多种疾病相关背景下观察到的转录状态改变有关,因而支持其用于机制研究。
RIP140 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NRIP1的表达。
RIP140 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的NRIP1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于NRIP1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性RIP140表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的NRIP1位点,并能够研究内源性位点上依赖于RIP140的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NRIP1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟RIP140通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。