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Ribosomal Protein L39CRISPR激活质粒(h) | sc-410990-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
Ribosomal Protein L39CRISPR激活质粒(h2) | sc-410990-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
RPL39 编码核糖体蛋白 L39,是 60S 大亚基中的一种小型碱性组分,有助于核糖体装配,并维持高效细胞质翻译所需的稳定 rRNA–蛋白相互作用。作为核心翻译机器的一部分,RPL39 会影响蛋白质稳态与细胞生长程序,而这些过程与 mTOR 信号、整合性应激反应以及核糖体生物发生密切耦联。核糖体蛋白表达的扰动可改变翻译能力与保真度,从而影响参与细胞周期调控与应激适应的调控因子的合成。核糖体生物发生与翻译失调是多种癌症及遗传性核糖体病的反复特征,因此 RPL39 是一个有价值的研究节点,可用于探究翻译输出如何塑造与疾病相关的表型。
Ribosomal Protein L39 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性RPL39的表达。
Ribosomal Protein L39 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的RPL39基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于RPL39转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Ribosomal Protein L39表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的RPL39位点,并能够研究内源性位点上依赖于Ribosomal Protein L39的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在RPL39表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Ribosomal Protein L39通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。