REV1CRISPR激活质粒(h): sc-402251-ACT

人类 REV1 编码一种 Y 家族 DNA 聚合酶，在 DNA 损伤耐受过程中既充当支架蛋白，又作为具有专门功能的跨损伤合成（TLS）酶。REV1 通过与 REV7/MAD2L2 及其他 TLS 因子的相互作用，协调在受损碱基对面进行插入反应并募集聚合酶 ζ，从而帮助复制叉绕过体积庞大的 DNA 加合物。该活性与复制应激反应、复制后修复以及维持基因组稳定性的通路相互整合；TLS 平衡的改变会影响诱变水平以及细胞对基因毒性应激的敏感性。因此，REV1 被广泛用于研究 DNA 修复机制、复制保真性以及与癌症生物学和其他基因组不稳定相关疾病有关的突变累积过程。

REV1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性REV1的表达。

REV1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的REV1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于REV1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性REV1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的REV1位点，并能够研究内源性位点上依赖于REV1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在REV1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟REV1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。