Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Ref-1 Antibody (C-4) Alexa Fluor® 647: sc-17774 AF647. Direct fluorescent western blot analysis of Ref-1 expression in A-431 nuclear extract (A) and Daudi (B), Y79 (C), A549 (D) and U-2 OS (E) whole cell lysates. Blocked with UltraCruz® Blocking Reagent: sc-516214. Cruz Marker™ Molecular Weight Standards detected with Cruz Marker™ MW Tag-Alexa Fluor® 488: sc-516790.
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Ref-1双切口酶质粒(h): sc-400932-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Ref-1 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- Ref-1双切酶质粒（h）和Ref-1双切酶质粒（h2）编码针对APEX1的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Ref-1: sc-17774，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Ref-1双切口酶质粒(h) | sc-400932-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
Ref-1双切口酶质粒(h2) | sc-400932-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
APEX1 编码人类氧化还原因子-1（Ref-1），这是一种多功能蛋白，能够将 DNA 碱基切除修复与转录因子的氧化还原调控整合在一起。作为主要的无嘌呤/无嘧啶（AP）内切核酸酶，APEX1 可处理由氧化损伤和烷基化产生的无碱基位点，并协调修复合成过程，从而维持基因组稳定性。Ref-1 还可调节 NF-κB、AP-1、HIF-1α 和 p53 等因子的 DNA 结合活性，将细胞氧化还原状态与应激反应相关的转录程序连接起来。APEX1/Ref-1 活性失调与氧化应激应对异常、炎症信号改变以及基因组不稳定性相关，这些现象在包括癌症和神经退行性疾病在内的多种疾病相关背景中均有观察到。
Ref-1 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 APEX1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对APEX1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏APEX1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了APEX1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。