RecoverinCRISPR激活质粒(h): sc-404106-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Recoverin CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- Recoverin CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 Recoverin CRISPR 激活质粒 (h) 和 Recoverin CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 RCVRN 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Recoverin: sc-53520，通过WB, IF或者IHC分析
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
RecoverinCRISPR激活质粒(h) | sc-404106-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 RCVRN 基因编码 recoverin，这是一种在视网膜中富集的 EF-hand 型 Ca²⁺ 结合蛋白，可作为 Ca²⁺-肉豆蔻酰化开关调节光信号转导。在明适应过程中，细胞内 Ca²⁺ 水平发生变化时，recoverin 通过调控视紫红质激酶（GRK1）的活性，影响视紫红质的磷酸化动态以及杆细胞和锥细胞光感受器的恢复动力学。借助其在 GPCR 信号传导、Ca²⁺ 稳态以及 cGMP 依赖性视觉信号中的作用，recoverin 维持视网膜信号转导与适应功能的正常运行。recoverin 的表达或免疫反应性改变与多种视网膜功能异常相关，因此 RCVRN 是研究光感受器生物学与视觉信号网络机制的一个重要靶点。
Recoverin CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性RCVRN的表达。
Recoverin CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的RCVRN基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于RCVRN转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Recoverin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的RCVRN位点，并能够研究内源性位点上依赖于Recoverin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在RCVRN表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Recoverin通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。