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RBM4CRISPR激活质粒(h) | sc-403993-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
RBM4(RNA 结合基序蛋白 4)是一种多功能 RNA 结合蛋白,可调控 pre‑mRNA 的可变剪接、mRNA 稳定性以及翻译控制,从而将 RNA 加工与细胞状态转变联系起来。它参与与剪接体相关的过程,并在分化、应激反应以及细胞周期相关的转录本同工型重塑过程中,帮助协调基因表达程序。RBM4 依赖的剪接选择可通过改变代谢与细胞骨架组织等通路中的蛋白同工型比例来影响信号输出。RBM4 的表达或活性失调与癌症以及神经肌肉和代谢性疾病背景下观察到的异常剪接模式相关,因此是研究以 RNA 为中心的疾病机制的一个重要节点。
RBM4 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性RBM4的表达。
RBM4 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的RBM4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于RBM4转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性RBM4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的RBM4位点,并能够研究内源性位点上依赖于RBM4的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在RBM4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟RBM4通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。