RBM35ACRISPR激活质粒(h2): sc-405645-ACT-2

人类ESRP1（epithelial splicing regulatory protein 1，中文常译为“上皮剪接调控蛋白1”；又名RBM35A）编码一种RNA结合型剪接因子，能够识别富含GU的序列基序，从而调控具有上皮细胞特征的可变剪接程序。ESRP1通过协调参与细胞间黏附、细胞骨架组织、细胞极性以及与上皮—间质转化（EMT）相关的信号网络（包括与FGFR和CD44异构体调控相交的通路）中多种转录本的异构体选择，帮助维持上皮细胞身份。ESRP1介导的剪接一旦失衡，已在多种上皮来源癌症中与EMT状态改变及肿瘤进展表型相关，提示其可能是转移相关重塑过程中RNA加工改变的关键节点。对ESRP1进行基因编辑可用于开展剪接依赖性调控机制研究、异构体分辨率的转录组学分析，并在人体细胞模型中对EMT与上皮分化程序进行功能性检验。

RBM35A CRISPR激活质粒（h2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性ESRP1的表达。

RBM35A CRISPR激活质粒（h2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的ESRP1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于ESRP1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性RBM35A表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的ESRP1位点，并能够研究内源性位点上依赖于RBM35A的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在ESRP1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟RBM35A通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。