RANTESCRISPR激活质粒(h): sc-401806-ACT

CCL5 编码趋化因子 RANTES。RANTES 是 CCR1、CCR3 和 CCR5 的分泌型配体，在炎症反应过程中协调白细胞的募集、黏附与激活。RANTES 信号可启动依赖 GPCR 的级联反应，并与趋化、整合素激活、钙离子通量以及下游 MAPK 和 PI3K 通路相互交叉，从而塑造免疫细胞在组织内的迁移与分布。CCL5 表达失调与慢性炎症微环境和免疫监视改变相关，因此在自身免疫、感染相关的免疫动态以及肿瘤—免疫相互作用等研究中具有重要意义。在人源体系中，CCL5/RANTES 常用于研究髓系细胞与 T 细胞之间的通讯、细胞因子网络以及基质—免疫互作。

RANTES CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性CCL5的表达。

RANTES CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的CCL5基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于CCL5转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性RANTES表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的CCL5位点，并能够研究内源性位点上依赖于RANTES的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在CCL5表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟RANTES通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。