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Rab 7慢病毒激活颗粒(m) | sc-422571-LAC | 200 µl | CNY3422.00 |
Rab7 编码 Rab 7,这是一种小型 GTP 酶,通过协调招募参与囊泡系留与融合的效应复合物,调控晚期内体成熟、内体–溶酶体运输以及溶酶体降解。在小鼠细胞中,Rab 7 的活性与自噬和溶酶体生物发生通路相互整合,从而影响货物周转、受体下调以及膜重塑。Rab7 依赖的运输过程一旦失调,会扰乱蛋白质稳态与细胞器质量控制;这些过程与神经退行性疾病、感染生物学以及癌细胞代谢等密切相关。作为内体–溶酶体网络中的关键枢纽,Rab 7 常被用于检测内吞通量、自噬体–溶酶体融合以及细胞内病原体运输。
Rab 7 慢病毒激活颗粒(m)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Rab7 表达。
Rab 7 慢病毒激活颗粒(m)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Rab7转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性Rab 7表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Rab7 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。