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Rab 1BCRISPR激活质粒(h) | sc-402021-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
RAB1B 编码小型 GTP 酶 Rab 1B,它是内质网到高尔基体以及高尔基体内囊泡运输的核心调控因子,负责协调货物分选、膜系牵引(tethering)以及依赖 SNARE 的膜融合。Rab 1B 通过在 GDP 结合态与 GTP 结合态之间循环切换,调控早期分泌通路的动态变化,从而影响细胞器稳态、糖蛋白加工以及分泌相关蛋白质稳态(proteostasis)。Rab1 家族信号还与自噬及应激响应型运输程序相互衔接,将膜运输与营养感知和质量控制联系起来。Rab1 介导的运输一旦失调,可能通过改变分泌与细胞器应激反应,产生与神经退行性疾病、感染生物学以及肿瘤相关信号通路有关的细胞表型。
Rab 1B CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性RAB1B的表达。
Rab 1B CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的RAB1B基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于RAB1B转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Rab 1B表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的RAB1B位点,并能够研究内源性位点上依赖于Rab 1B的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在RAB1B表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Rab 1B通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。