Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Simultaneous direct near-infrared western blot analysis of Pyrin expression, detected with Pyrin Antibody (C-11) Alexa Fluor® 790: sc-390938 AF790 and β-Actin expression, detected with β-Actin (C4) Alexa Fluor® 680: sc-47778 AF680 in HeLa whole cell lysate. Blocked with UltraCruz® Blocking Reagent: sc-516214.
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Pyrin双切口酶质粒(h): sc-403193-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Pyrin 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- Pyrin双切酶质粒（h）和Pyrin双切酶质粒（h2）编码针对MEFV的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Pyrin: sc-390938，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Pyrin双切口酶质粒(h) | sc-403193-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
Pyrin双切口酶质粒(h2) | sc-403193-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
MEFV 编码 pyrin，是一种在髓系细胞中富集的先天免疫传感器，可响应细胞骨架变化及调控 Rho GTPase 的信号线索，进而调节炎症小体信号传导与炎症性半胱天冬酶的激活。Pyrin 有助于协调依赖 ASC 的炎症小体复合物组装，影响 IL‑1 家族细胞因子的成熟以及塑形中性粒细胞驱动炎症的焦亡通路。MEFV 活性失调或其变异与自身炎症表型及先天免疫反应阈值的改变相关，因此是解析炎症信号网络的一个有价值位点。在人源细胞体系中，对 MEFV 的扰动常用于研究炎症小体调控、细胞因子加工处理，以及细胞骨架动力学与先天免疫感知之间的串扰。
Pyrin 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 MEFV 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对MEFV内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏MEFV的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了MEFV基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。