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PRL-1双切口酶质粒(m) | sc-422499-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Ptp4a1 基因编码 PRL-1,这是一种经异戊二烯化修饰的蛋白酪氨酸磷酸酶,定位于细胞膜,并调控与细胞骨架重塑、细胞周期推进以及定向迁移相关的磷酸化依赖性信号传导。PRL-1 的活性与调控黏着斑动态及由小 GTP 酶驱动的运动程序等通路相互衔接,从而影响细胞对细胞外线索的响应。PRL 家族磷酸酶信号的异常与肿瘤生物学中增殖失衡和侵袭表型相关;此外,PRL-1 也常在免疫细胞转运与组织重塑的研究背景下被关注。因此,Ptp4a1 是在小鼠模型中用于解析磷酸酶对信号网络与细胞可塑性调控的一个有用靶点。
PRL-1 双切酶质粒(m)由一对匹配的质粒组成,专为在 mouse 细胞系中对 Ptp4a1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Ptp4a1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏Ptp4a1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了Ptp4a1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。