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PrealbuminCRISPR激活质粒(h) | sc-401083-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 TTR 基因编码前白蛋白(转甲状腺素蛋白,transthyretin),这是一种分泌型同源四聚体,可运输甲状腺素(T4),并通过与视黄醇结合蛋白相互作用来运输视黄醇,从而支持内分泌激素分布与维生素 A 稳态。TTR 主要由肝细胞和脉络丛上皮产生,并参与血浆与脑脊液中的蛋白质转运。TTR 表达、折叠或四聚体稳定性的扰动与细胞外蛋白聚集及组织功能障碍相关,因此常被用作研究蛋白稳态、分泌过程与淀粉样生物学的经典模型。对 TTR 调控的研究也有助于理解肝脏转录程序以及影响分泌蛋白质量控制的应激响应通路。
Prealbumin CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性TTR的表达。
Prealbumin CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的TTR基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于TTR转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Prealbumin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的TTR位点,并能够研究内源性位点上依赖于Prealbumin的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在TTR表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Prealbumin通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。