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PRDM11CRISPR激活质粒(h) | sc-417861-ACT | 20 µg | $397.00 |
PRDM11 编码一种含 PR/SET 结构域的锌指蛋白,参与染色质相关的转录调控以及谱系特异性的基因表达程序。作为 PRDM 家族成员,PRDM11 与表观遗传调控机制相关,这些机制协同细胞状态转换,包括分化以及细胞身份的维持。PRDM 家族转录调节因子的失调与发育通路改变以及癌症和其他疾病中的异常基因表达网络有关,因此有必要研究 PRDM11 依赖的转录调控回路。对 PRDM11 功能的研究有助于阐明染色质重塑、转录因子募集以及对下游靶基因进行情境依赖性调控的机制。
PRDM11 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PRDM11的表达。
PRDM11 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的PRDM11基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于PRDM11转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性PRDM11表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的PRDM11位点,并能够研究内源性位点上依赖于PRDM11的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PRDM11表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PRDM11通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。