PP2CκCRISPR激活质粒(m): sc-433975-ACT
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- PP2Cκ CRISPER激活质粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- PP2Cκ CRISPR 激活质粒 (m)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 PP2Cκ CRISPR 激活质粒 (m) 和 PP2Cκ CRISPR 激活质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别针对 Ppm1k 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
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| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
PP2CκCRISPR激活质粒(m) | sc-433975-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
Ppm1k 编码线粒体磷酸酶 PP2Cκ，它属于 Mg2+/Mn2+ 依赖性的 PP2C 家族酶，通过去磷酸化支链氨基酸（BCAA）分解代谢中涉及的关键靶点来调控氧化代谢。具体而言，PP2Cκ 调节支链 α-酮酸脱氢酶（BCKDH）复合体的活性，从而将线粒体营养物质通量与细胞能量稳态联系起来。由于其对 BCAA 利用和线粒体功能的影响，Ppm1k 常用于研究代谢应激反应与组织特异性的生物能量学过程，包括与胰岛素敏感性、脂肪与肌肉代谢以及线粒体功能障碍相关表型等相关的模型。在实验系统中，该通路失调与氨基酸稳态改变以及与代谢疾病相关的信号状态有关。
PP2Cκ CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Ppm1k的表达。
PP2Cκ CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Ppm1k基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Ppm1k转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PP2Cκ表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Ppm1k位点，并能够研究内源性位点上依赖于PP2Cκ的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Ppm1k表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PP2Cκ通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。