POL HCRISPR激活质粒(h): sc-401794-ACT

POLH 编码 DNA 聚合酶 η（Pol η），这是一种特殊的 Y 家族聚合酶，在 S 期通过跨损伤 DNA 合成（translesion DNA synthesis）绕过紫外线诱导的环丁烷嘧啶二聚体以及其他体积较大的 DNA 加合物。通过延伸停滞的复制叉，POLH 有助于维持基因组稳定性，并与 DNA 损伤应答、核苷酸切除修复以及复制后修复通路协同作用。POLH 缺陷会削弱损伤跨越的保真性并增加突变负荷，使其功能异常与紫外线敏感性和癌症易感表型相关，其中包括着色性干皮病变异型（xeroderma pigmentosum variant）。因此，POLH 被广泛用于研究复制应激生物学、诱变机制以及决定 DNA 修复通路选择的通路串扰。

POL H CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性POLH的表达。

POL H CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的POLH基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于POLH转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性POL H表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的POLH位点，并能够研究内源性位点上依赖于POL H的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在POLH表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟POL H通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。