PLIC-1CRISPR激活质粒(h): sc-408872-ACT

UBQLN1 编码泛素连接素-1（ubiquilin-1，亦称 PLIC-1），这是一种带有泛素样结构域/泛素结合结构域的适配蛋白，可将多聚泛素化底物连接到 26S 蛋白酶体，从而帮助维持蛋白质稳态。PLIC-1 参与依赖泛素的蛋白水解、内质网相关降解（ERAD）以及应激响应型蛋白稳态通路，影响错误折叠或易聚集蛋白的周转。由于其在蛋白质质量控制与转运中的作用，UBQLN1 常在神经退行性疾病相关的蛋白聚集与细胞应激表型研究中被重点关注。UBQLN1 功能或表达的改变也与癌症及炎症相关信号环境中的蛋白稳态失衡有关，因此支持其在通路与机制导向研究中的应用。

PLIC-1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性UBQLN1的表达。

PLIC-1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的UBQLN1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于UBQLN1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PLIC-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的UBQLN1位点，并能够研究内源性位点上依赖于PLIC-1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在UBQLN1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PLIC-1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。