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PlfrCRISPR激活质粒(m) | sc-422306-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
小鼠 Prl7d1 编码泌乳素家族 7、d 亚家族成员 1(Plfr)。Plfr 是一种胎盘富集的、类似细胞因子的分泌蛋白,被认为参与滋养层分化以及母胎界面相关的生物学过程。作为啮齿类扩增的泌乳素/生长激素家族的一部分,Plfr 与内分泌和旁分泌信号过程相关,可影响妊娠期的蜕膜化、胎盘血管重塑以及免疫调节。泌乳素家族胎盘基因的表达失调常被用作分子读出指标,用于研究着床失败、异常胎盘形成、胎儿生长受限以及妊娠相关炎症。因此,Prl7d1 可作为在小鼠模型中解析胎盘基因调控网络与生殖生理的有用标志物和功能节点。
Plfr CRISPR激活质粒(m)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Prl7d1的表达。
Plfr CRISPR激活质粒(m)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的Prl7d1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于Prl7d1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Plfr表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的Prl7d1位点,并能够研究内源性位点上依赖于Plfr的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Prl7d1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Plfr通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。