plexin-B1CRISPR激活质粒(h): sc-401840-ACT

PLXNB1 编码跨膜受体 plexin-B1，它是 4 类 semaphorin 的受体，能够协调依赖细胞接触的信号传递，从而调控细胞骨架重塑、定向细胞迁移以及轴突导向。Plexin-B1 通过 Rho 家族 GTP 酶及其相关效应蛋白整合多种信号线索，影响肌动蛋白动态、黏附周转与细胞极性程序，进而对组织模式形成与屏障结构的组织产生下游影响。在人体生物学中，PLXNB1 表达或信号传导的改变与癌症模型中细胞运动失调和侵袭行为相关，也与神经发育过程相关，其中 semaphorin–plexin 通路塑造神经元连接性。这些特征使 plexin-B1 成为研究 semaphorin 信号、Rho/ROCK 相关重塑以及细胞–细胞与细胞–基质相互作用在特定情境下变化的一个重要节点。

plexin-B1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PLXNB1的表达。

plexin-B1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PLXNB1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PLXNB1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性plexin-B1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PLXNB1位点，并能够研究内源性位点上依赖于plexin-B1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PLXNB1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟plexin-B1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。