PLC β1CRISPR激活质粒(h): sc-401141-ACT

人类 PLCB1 基因编码磷脂酶 C β1（PLCβ1），它是 G 蛋白偶联受体（GPCR）下游的关键效应分子，将 Gαq/11 信号与磷脂酰肌醇周转过程相连接。被激活后，PLCβ1 水解 PIP2 生成 IP3 和二酰甘油（DAG），从而触发细胞内 Ca2+ 释放与 PKC 激活，进而影响分泌、兴奋性以及转录程序。该信号轴与 MAPK 及钙依赖性通路相互整合，共同塑造神经元和免疫细胞的反应；而 PLCB1 活性异常已与神经精神和神经系统表型，以及疾病相关情境下的细胞信号失调相关联。研究 PLCB1 的调控机制有助于阐明由受体驱动的第二信使动态如何控制下游基因表达与细胞状态。

PLC β1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PLCB1的表达。

PLC β1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PLCB1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PLCB1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PLC β1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PLCB1位点，并能够研究内源性位点上依赖于PLC β1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PLCB1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PLC β1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。