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PLA2RCRISPR激活质粒(h) | sc-411636-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
PLA2R1 编码磷脂酶 A2 受体(PLA2R),它属于 I 型跨膜的 C 型凝集素家族成员,可与分泌型磷脂酶 A2 酶及其他配体结合,从而调控这些分子的细胞摄取、定位以及下游信号传导。通过受体介导的内吞作用并调节细胞外脂质介质的可用性,PLA2R 能够影响炎症信号、氧化应激反应以及细胞—基质相互作用。在肾脏生物学中,PLA2R 在足细胞中表达,并在自身免疫性膜性肾病研究中被广泛关注;在该疾病中,针对 PLA2R 的免疫反应以及受体动力学的改变与肾小球损伤相关。更广泛地说,PLA2R1 还被用于研究调控细胞存活、衰老相关程序和组织重塑的通路,提示其与炎症相关及纤维化表型具有重要关联。
PLA2R CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PLA2R1的表达。
PLA2R CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的PLA2R1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于PLA2R1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性PLA2R表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的PLA2R1位点,并能够研究内源性位点上依赖于PLA2R的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PLA2R1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PLA2R通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。