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PKD2慢病毒激活颗粒(m2) | sc-430381-LAC-2 | 200 µl | CNY3422.00 |
小鼠Prkd2基因编码蛋白激酶D2(PKD2),它是PKD家族的一种丝氨酸/苏氨酸激酶,可在二酰甘油及新型PKC同工型的下游传递信号,通过协调磷酸化程序来调控基因表达、囊泡运输、细胞骨架动力学以及细胞存活;PKD2的活性常与高尔基体及膜相关信号相联系,整合来自GPCR和受体酪氨酸激酶通路的输入,从而调节与MAPK和NF-κB相关的反应以及刺激依赖性的细胞重塑;PRKD2/PKD2信号失调与癌症生物学中的异常增殖、炎症信号和转移特征有关,也在更广泛的应激与免疫相关过程中发挥作用;在小鼠模型中对Prkd2进行基因编辑可支持对激酶结构域功能、通路串扰以及磷酸化依赖表型的机制研究,并可结合蛋白质组学、活细胞成像和体内疾病相关研究范式开展分析。
PKD2 慢病毒激活颗粒(m2)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 Prkd2 表达。
PKD2 慢病毒激活颗粒(m2)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在Prkd2转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性PKD2表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 Prkd2 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。