PIWIL2CRISPR激活质粒(h): sc-402211-ACT

PIWIL2（HIWI2）编码一种 PIWI 亚家族的 Argonaute 蛋白，能够结合 piRNA，并参与由小 RNA 引导的转座元件沉默，从而在生殖细胞及类生殖细胞环境中维护基因组完整性。通过参与 piRNA 生物发生与表观遗传调控，PIWIL2 可影响染色质状态、DNA 甲基化模式，以及对靶 RNA 的转录后调控。已有研究在多种癌症类型中报道 PIWIL2 异常表达，并常与肿瘤相关的干细胞样表型、增殖程序及耐受/耐药相关信号网络联系在一起。这些特征使 PIWIL2 成为解析人类细胞中 RNA 介导的基因调控与基因组防御通路的一个重要节点。

PIWIL2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PIWIL2的表达。

PIWIL2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PIWIL2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PIWIL2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PIWIL2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PIWIL2位点，并能够研究内源性位点上依赖于PIWIL2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PIWIL2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PIWIL2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。