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PDK2双切口酶质粒(h) | sc-416916-NIC | 20 µg | CNY3084.00 |
丙酮酸脱氢酶激酶2(PDK2)是一种线粒体丝氨酸/苏氨酸激酶,可对丙酮酸脱氢酶复合体进行磷酸化并抑制其活性,从而限制丙酮酸向乙酰辅酶A(acetyl‑CoA)的转化,并使碳流偏离三羧酸循环(TCA循环)。通过调控丙酮酸–乳酸平衡与氧化代谢,PDK2将营养物质可利用性与线粒体呼吸以及脂质/葡萄糖稳态相整合。PDK2活性嵌入代谢应激信号通路之中,可在缺氧或营养过剩条件下影响活性氧(ROS)的处理与生物能量适应。PDK2表达或活性失调与胰岛素敏感性改变、代谢重塑以及多种疾病背景下观察到的增殖表型相关,因此可作为研究代谢控制机制的关键节点。
PDK2 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 PDK2 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对PDK2内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏PDK2的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了PDK2基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。