The Double Nickase Plasmid features a U6 promoter for sgRNA expression, a 20 nt targeting sequence, and a gRNA scaffold to guide Cas9n. It includes a CBh promoter for Cas9n (D10A) and puromycin resistance, GFP for transfection verification, and nuclear localization signals (NLS). The 2A peptide allows co-expression of Cas9n and Puro from a single promoter, enabling precise genome editing with reduced off-target effects.
Pdcd-1双切口酶质粒(h): sc-403008-NIC
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Pdcd-1 双切口酶质粒（h）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- Pdcd-1双切酶质粒（h）和Pdcd-1双切酶质粒（h2）编码针对PDCD1的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
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Pdcd-1双切口酶质粒(h) | sc-403008-NIC | 20 µg | $410.00 |
PDCD1 编码 Pdcd-1（PD-1），这是一种抑制性的免疫检查点受体，主要表达于活化的 T 细胞、B 细胞以及部分髓系细胞亚群。它通过减弱抗原受体信号传导来维持外周免疫耐受。Pdcd-1 与 PD-L1 或 PD-L2 结合后，会招募 SHP2 等磷酸酶，对近端信号节点进行去磷酸化，从而抑制 PI3K–AKT 和 RAS–MAPK 通路，并降低细胞因子产生、增殖能力及细胞毒活性。PDCD1 的调控会影响慢性抗原暴露时的 T 细胞衰竭程序，并通过调节效应功能与免疫监视来塑造肿瘤微环境。Pdcd-1 信号失衡与肿瘤免疫逃逸、持续性病毒感染以及与耐受检查点改变相关的自身免疫表型有关。
Pdcd-1 双切酶质粒（h）由一对匹配的质粒组成，专为在 human 细胞系中对 PDCD1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对PDCD1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏PDCD1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了PDCD1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。