Each CRISPR/Cas9 Knockout (KO) Plasmid product consists of a pool of 3 plasmids designed to ensure identification and cleavage of a specific gene for maximum knockout efficiency. Each plasmid encodes a unique 20 nt sequence derived from the GeCKO (v2) library.
PAWP CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-406196
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- PAWP CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在PAWP基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
PAWP CRISPR/Cas9 KO质粒 (h) | sc-406196 | 20 µg | CNY2986.00 |
概述
WBP2NL 编码 PAWP（受精后顶体 WW 结构域结合蛋白），这是一种由精子携带、在受精后顶体鞘中富集的因子，可在受精过程中促进卵母细胞激活。PAWP 含有 PPXY 基序，能够与含 WW 结构域的信号适配蛋白结合，从而将其连接到依赖磷酸化的调控网络；该网络被认为参与早期胚胎的钙离子振荡以及细胞周期的重新启动。功能研究表明，PAWP 的表达或活性发生改变与受精受损、胚胎发育异常以及某些类型的男性因素不育有关。作为一种生殖细胞特异性的调控因子，WBP2NL 为解析精卵信号传导、配子质量控制以及生殖通路的交叉调控提供了一个便于研究的模型。
PAWP CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中WBP2NL基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对WBP2NL基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏WBP2NL开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使PAWP蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建WBP2NL缺失的细胞模型，用于PAWP信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 PAWP 功能至关重要的 WBP2NL 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 WBP2NL 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 PAWP CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 PAWP CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 WBP2NL 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 PAWP HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 PAWP HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由WBP2NL同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定WBP2NL靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。