PAI-1/SERPINE1CRISPR激活质粒(m2): sc-422287-ACT-2

小鼠Serpine1基因编码纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1），这是一种分泌型丝氨酸蛋白酶抑制剂（serpin），可抑制组织型与尿激酶型纤溶酶原激活物（tPA/uPA），从而限制纤溶酶的生成，并进而调控纤维蛋白溶解、细胞周围蛋白水解以及细胞外基质重塑。PAI-1整合来自TGF-β、炎性细胞因子与氧化应激通路的信号线索，影响细胞黏附、迁移与组织修复，并对伤口愈合和纤维化性重塑产生下游作用。Serpine1/PAI-1表达失调与血栓形成和出血表型、肥胖相关的代谢性炎症以及器官纤维化有关，因此是研究止血、血管生物学与慢性炎症性病理机制的重要靶点。在小鼠模型中对Serpine1进行基因编辑或扰动，可用于在体内及细胞实验中功能性解析蛋白酶–抗蛋白酶平衡、基质周转以及将炎症与重塑耦联的信号网络。

PAI-1/SERPINE1 CRISPR激活质粒（m2）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Serpine1的表达。

PAI-1/SERPINE1 CRISPR激活质粒（m2）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Serpine1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Serpine1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PAI-1/SERPINE1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Serpine1位点，并能够研究内源性位点上依赖于PAI-1/SERPINE1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Serpine1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PAI-1/SERPINE1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。