PAF acetylhydrolase 2CRISPR激活质粒(h): sc-410924-ACT

PAFAH2 编码血小板活化因子乙酰水解酶 2（PAF acetylhydrolase 2），这是一种胞质型磷脂酶 A2，可水解血小板活化因子（PAF）及氧化磷脂，从而调控生物活性脂质信号传导与膜脂稳态。通过限制 PAF 介导的信号并清除过氧化磷脂，PAFAH2 有助于调节炎症反应、氧化应激，以及与细胞存活和脂质重塑相关的下游通路。对 PAF 及氧化脂质介质的调控异常与免疫信号失衡和代谢应激表型有关，因此 PAFAH2 对研究炎症相关的细胞功能障碍机制具有重要意义。

PAF acetylhydrolase 2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PAFAH2的表达。

PAF acetylhydrolase 2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PAFAH2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PAFAH2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PAF acetylhydrolase 2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PAFAH2位点，并能够研究内源性位点上依赖于PAF acetylhydrolase 2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PAFAH2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PAF acetylhydrolase 2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。