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p115慢病毒激活颗粒(h) | sc-403918-LAC | 200 µl | $455.00 |
USO1 编码 p115,这是一种外周膜结合的卷曲螺旋(coiled-coil)系链因子,在早期分泌途径中协调囊泡的停靠与融合。p115 通过与 Rab GTP 酶和 golgin 蛋白相互作用,在 COPII 来源的运输载体与高尔基体膜之间起桥梁作用,从而支持内质网到高尔基体(ER-to-Golgi)的转运、高尔基带(Golgi ribbon)的组织,以及有丝分裂期间高尔基体的重新组装。借助其在膜运输与细胞器结构构建中的作用,p115 会影响蛋白质稳态(proteostasis)、受体与整合素在细胞表面的递送,以及与增殖和迁移相关的信号输出。涉及 p115 的分泌运输失调与高尔基应激通路,已在神经退行性疾病、感染以及癌症相关的糖基化与分泌改变等背景中得到研究。
p115 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 USO1 表达。
p115 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在USO1转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性p115表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 USO1 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。