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OTUD7BCRISPR激活质粒(h) | sc-403268-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
OTUD7BCRISPR激活质粒(h2) | sc-403268-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类 OTUD7B 基因编码一种去泛素化酶(含 OTU 结构域),可切割泛素链,从而精细调控蛋白稳定性与信号强度。OTUD7B 已被证实参与免疫与炎症通路的调控,包括对 NF-κB 及相关受体近端信号复合体的泛素依赖性调节,进而塑造下游转录程序。通过影响泛素动态,OTUD7B 还会作用于信号终止、应激反应和蛋白质稳态等细胞过程。OTUD7B 活性或表达失衡与免疫信号异常及与癌症相关的表型有关,因此是研究泛素介导调控机制的一个有价值节点。
OTUD7B CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性OTUD7B的表达。
OTUD7B CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的OTUD7B基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于OTUD7B转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性OTUD7B表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的OTUD7B位点,并能够研究内源性位点上依赖于OTUD7B的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在OTUD7B表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟OTUD7B通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。