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ODR4CRISPR激活质粒(h) | sc-417633-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
ODR4CRISPR激活质粒(h2) | sc-417633-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
人类基因 C1orf27 编码 ODR4,这是一种保守的多跨膜蛋白,被认为参与内质网及分泌途径的质量控制,在其中支持特定 G 蛋白偶联受体(GPCR)以及其他客户蛋白的成熟与运输。通过影响受体的生物发生与膜定位,ODR4 可调节与 GPCR 活性耦联的下游信号转导网络,包括影响细胞对细胞外刺激响应的相关通路。蛋白稳态与受体运输的改变与应激信号、分化以及神经和内分泌功能广泛相关,使 ODR4 成为解析膜蛋白处理过程的一个有用节点。这些过程的失调在多种复杂疾病背景中常见,因此支持在信号失衡与细胞应激模型中研究 ODR4,但不暗示任何临床结局。
ODR4 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性C1orf27的表达。
ODR4 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的C1orf27基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于C1orf27转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性ODR4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的C1orf27位点,并能够研究内源性位点上依赖于ODR4的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在C1orf27表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟ODR4通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。