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OAS3CRISPR激活质粒(h) | sc-405992-ACT | 20 µg | CNY2986.00 |
人源 OAS3(2′-5′-寡聚腺苷酸合成酶 3)是一种由干扰素诱导的酶,能够识别病毒及细胞来源的双链 RNA,并催化合成 2′-5′ 连接的寡聚腺苷酸。这些第二信使可激活 RNase L,促进靶向 RNA 降解,并塑造先天免疫信号程序;这些程序与抗病毒限制、炎症相关转录以及应激反应相互交叉。OAS3 活性整合到由干扰素/JAK–STAT 调控的通路中,并在感染过程中参与细胞对 RNA 稳态的调控。OAS3–RNase L 信号的失调已在多种研究中被探讨,包括对病毒感染易感性、异常的干扰素特征以及炎症性疾病状态的影响。
OAS3 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性OAS3的表达。
OAS3 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的OAS3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于OAS3转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性OAS3表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的OAS3位点,并能够研究内源性位点上依赖于OAS3的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在OAS3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟OAS3通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。