NTR1CRISPR激活质粒(h): sc-402552-ACT

神经降压素受体1（NTSR1/NTR1）属于A类GPCR，主要与Gq/11蛋白偶联，也可参与β-抑制蛋白（β-arrestin）依赖的信号传导，从而将神经降压素的结合与磷脂酶C激活、细胞内Ca²⁺动员以及MAPK/ERK通路输出联系起来。通过这些级联反应，NTR1影响神经传递、内分泌分泌、平滑肌收缩性，并调控细胞增殖与生存相关程序。人们在神经元兴奋性改变、炎症信号以及致癌通路串扰等背景下研究了NTSR1的表达与信号功能；在这些情境中，受体驱动的MAPK与PI3K/AKT活性可调节细胞状态转变。这些特性使NTSR1成为研究GPCR驱动的转录程序、受体去敏化/内吞以及疾病相关模型中通路重塑的一个有价值的关键节点。

NTR1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NTSR1的表达。

NTR1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的NTSR1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于NTSR1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性NTR1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的NTSR1位点，并能够研究内源性位点上依赖于NTR1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NTSR1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟NTR1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。