非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
NPC1 抗体 (G-1): sc-271335. 小鼠肝组织提取物中 NPC1 表达的 Western 印迹分析.
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
NPC1双切口酶质粒(m): sc-421941-NIC
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- NPC1 双切口酶质粒（m）含有一对质粒，分别编码D10A突变的Cas9核酸酶，和目标特异的 20 nt 向导RNA （gRNA），与其相应的/%base_sku_name%/ CRISPR/Cas9敲除质粒相比，它在基因敲除方面具有更好的特异性
- 成对的向导RNA序列与目标基因中约20个碱基对互补，从而使Cas9可以模仿DNA双链断裂（DSB），介导特异的基因组DNA双切割
- 质粒对中的一个包含供筛选使用的嘌呤霉素抗性基因；另一个包含供观察转染使用的绿色荧光蛋白标记
- NPC1双切酶质粒（m）和NPC1双切酶质粒（m2）编码针对Npc1的不同配对gRNA设计。其中一种或两种设计可能均有提供
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：NPC1: sc-271335，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
NPC1双切口酶质粒(m) | sc-421941-NIC | 20 µg | CNY3084.00 | |||
NPC1双切口酶质粒(m2) | sc-421941-NIC-2 | 20 µg | CNY3084.00 |
小鼠 Npc1 基因编码 NPC1，这是一种多跨膜的溶酶体膜蛋白，可与 NPC2 协同作用，将游离（未酯化）胆固醇及其他脂质从晚期内体/溶酶体动员并转运至细胞膜等细胞膜系统。通过调控细胞内甾醇运输，NPC1 影响胆固醇稳态、溶酶体功能，以及依赖适当膜脂组成的下游代谢信号通路。NPC1 活性受损会导致溶酶体脂质蓄积，并广泛扰动内体-溶酶体运输以及与自噬相关的过程。因此，Npc1 常被用作遗传学切入点，在小鼠细胞中构建脂质贮积表型模型，并解析以溶酶体为中心的代谢调控机制。
NPC1 双切酶质粒（m）由一对匹配的质粒组成，专为在 mouse 细胞系中对 Npc1 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对Npc1内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时，会产生错位的单链切口，从而共同形成错位双链断裂，这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径（最常见的是非同源末端连接（NHEJ））得到修复，从而导致插入或缺失，进而破坏Npc1的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合，双切口方法提高了编辑特异性，并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞，其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化，而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集，并简化了Npc1基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。