NPAS4CRISPR激活质粒(m): sc-432569-ACT
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- NPAS4 CRISPER激活质粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- NPAS4 CRISPR 激活质粒 (m)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 NPAS4 CRISPR 激活质粒 (m) 和 NPAS4 CRISPR 激活质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别针对 Npas4 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
NPAS4CRISPR激活质粒(m) | sc-432569-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
NPAS4CRISPR激活质粒(m2) | sc-432569-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
小鼠 Npas4 编码神经元 PAS 域蛋白 4（NPAS4）。NPAS4 是一种活动依赖性的碱性螺旋-环-螺旋（bHLH）PAS 转录因子，可将钙离子内流与调控抑制性突触发育以及兴奋性-抑制性平衡的基因程序连接起来。NPAS4 调控与突触可塑性、神经环路精细化及对刺激的反应性重塑相关的转录网络，整合来自神经元去极化及其下游 CREB 相关通路的信号。在研究环境中，NPAS4 表达改变与多种神经精神与神经发育表型相关，包括应激相关的行为适应、癫痫易感性和认知功能障碍，凸显其与网络稳定性机制的关联。作为一种快速的早期反应调控因子，NPAS4 常被用于探究神经元活动如何重塑转录状态与突触连接。
NPAS4 CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Npas4的表达。
NPAS4 CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Npas4基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Npas4转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性NPAS4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Npas4位点，并能够研究内源性位点上依赖于NPAS4的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Npas4表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟NPAS4通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。