NOS2/iNOSCRISPR激活质粒(h): sc-400066-ACT

人类 NOS2 基因编码诱导型一氧化氮合酶（iNOS），这是一种对炎症反应敏感的酶，可将 L-精氨酸转化为一氧化氮，并调控氧化还原信号传导、血管张力调节以及抗微生物防御。NOS2/iNOS 受 NF-κB 和 JAK/STAT 驱动的细胞因子通路强烈调控，并可通过亚硝化与氧化应激重塑细胞代谢和线粒体功能。NOS2 活性失调与慢性炎症状态、宿主–病原体相互作用以及肿瘤相关免疫重塑有关，其机制涉及对 DNA 损伤应答、血管生成和免疫细胞极化的影响。作为一种依赖情境的一氧化氮信号介导因子，NOS2 常在巨噬细胞、上皮细胞及癌症模型中被广泛研究，用于解析炎症调控网络与应激适应机制。

NOS2/iNOS CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NOS2的表达。

NOS2/iNOS CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的NOS2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于NOS2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性NOS2/iNOS表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的NOS2位点，并能够研究内源性位点上依赖于NOS2/iNOS的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NOS2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟NOS2/iNOS通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。