Nop56CRISPR激活质粒(h): sc-404035-ACT

人类 NOP56 基因编码 Nop56 蛋白，它是 box C/D 小核仁核糖核蛋白复合体（snoRNPs）的关键核仁核心成分，对核糖体生物发生必不可少。该类 snoRNPs 在核糖体生成过程中负责引导前体 rRNA 的 2′-O-甲基化修饰及加工。Nop56 通过与 fibrillarin（纤维蛋白）及其他 snoRNP 因子的相互作用，支持 18S 与 28S rRNA 的成熟以及核糖体亚基的正确装配，从而与整体翻译能力和核仁稳态密切相关。核糖体生物发生受损及核仁应激通路的激活可影响细胞周期调控与蛋白质稳态，因此 NOP56 的功能也与生长调控和应激适应研究相关。此外，NOP56 还被认为参与脊髓小脑共济失调 36 型（SCA36）中与重复序列扩增相关的神经退行性机制，促使研究者进一步从 RNA 代谢与核仁功能障碍角度开展机制研究。

Nop56 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NOP56的表达。

Nop56 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的NOP56基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于NOP56转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Nop56表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的NOP56位点，并能够研究内源性位点上依赖于Nop56的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NOP56表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Nop56通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。