NidogenCRISPR激活质粒(m): sc-421895-ACT

小鼠 Nid1 基因编码巢蛋白（nidogen/entactin），这是一种基底膜的核心糖蛋白，可连接层粘连蛋白（laminin）与 IV 型胶原网络，从而稳定细胞外基质的结构。Nidogen 支持细胞–基质黏附、组织区室化以及信号呈递，进而影响与整合素和生长因子相关的通路，这些通路共同调控细胞迁移、极性与分化。在神经系统中，Nid1 有助于维持神经元周围网与血管基底膜的完整性，从而影响突触稳定以及神经血管相互作用。由 nidogen 依赖的基质组织改变与发育缺陷、类似纤维化的重塑，以及细胞外基质动态失调所伴随的侵袭性行为等研究密切相关。

Nidogen CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Nid1的表达。

Nidogen CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Nid1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Nid1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Nidogen表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Nid1位点，并能够研究内源性位点上依赖于Nidogen的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Nid1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Nidogen通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。