nicastrinCRISPR激活质粒(h): sc-402790-ACT

人类 NCSTN 基因编码 nicastrin，这是一种 I 型跨膜糖蛋白，是 γ-分泌酶复合体的关键亚基，参与底物识别并促进含 presenilin 的蛋白酶复合体的成熟。通过 γ-分泌酶活性，nicastrin 促进对多种底物（包括 NOTCH 受体和淀粉样前体蛋白）的受调控膜内蛋白水解（regulated intramembrane proteolysis），从而将 NCSTN 与 Notch 信号传导、细胞命运决定以及膜蛋白周转联系起来。γ-分泌酶组分的扰动可改变分化程序、炎症信号以及蛋白稳态（proteostasis），因此 NCSTN 被广泛研究，涉及神经生物学、上皮稳态与皮肤生物学等相关通路。NCSTN 的失调及其变异与 Notch 通路异常活性以及表皮或免疫反应改变相关的疾病有关，为功能基因组学研究提供了机制层面的背景。

nicastrin CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NCSTN的表达。

nicastrin CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的NCSTN基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于NCSTN转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性nicastrin表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的NCSTN位点，并能够研究内源性位点上依赖于nicastrin的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NCSTN表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟nicastrin通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。