NHE-1CRISPR激活质粒(h): sc-400748-ACT

SLC9A1 编码人源 Na⁺/H⁺ 交换体 1（NHE-1），这是一种位于质膜的反向转运蛋白，通过以细胞外 Na⁺ 交换并排出细胞内 H⁺ 来维持胞质 pH、调控细胞体积并支持离子稳态。NHE-1 的活性与生长因子信号传导和细胞骨架重塑相互耦联，从而影响细胞增殖、迁移与应激适应，并参与对代谢与酶活性的 pH 依赖性调控。在癌症生物学中，NHE-1 功能及 pH 稳态的失调与细胞存活和运动程序的改变相关；在心血管与神经科学研究中，也与缺血相关的损伤机制有关。由于 NHE-1 将离子转运与信号输出相连接，SLC9A1 常被用于研究涉及 MAPK/ERK、Rho GTP 酶以及细胞对缺氧和氧化应激反应等通路。

NHE-1 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC9A1的表达。

NHE-1 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SLC9A1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SLC9A1转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性NHE-1表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SLC9A1位点，并能够研究内源性位点上依赖于NHE-1的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC9A1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟NHE-1通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。