非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
NF-L 抗体 (8A1): sc-20012. SK-N-SH (A) 和 SH-SY5Y (B) 全细胞裂解液及小鼠脑组织提取物 (C) 中 NF-L 表达的近红外 western 印迹分析. 用 UltraCruz® 阻断试剂: sc-516214 阻断. 所用检测试剂: m-IgGκ BP-CFL 680: sc-516180.
非 CRISPR 数据：图片说明了可视化 CRISPR 实验结果的抗体质量。
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NF-L CRISPR/Cas9 KO质粒 (h): sc-402254
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- NF-L CRISPR/Cas9 基因敲除（KO）质粒（h） 是一组质粒混合物，每种质粒均编码 Cas9 核酸酶及针对特定靶点的 20 核苷酸引导 RNA（gRNA），其设计基于 GeCKO v2 文库中的序列，旨在实现最高的基因敲除效率
- gRNA序列引导Cas9在NF-L基因组位点诱导位点特异性双链断裂（DSBs），从而通过非同源末端连接（NHEJ）实现基因敲除
- 嘌呤霉素抗性基因和 RFP 基因两侧有 LoxP 位点，因此在建立稳定的基因敲除细胞系后，可以通过 Cre 重组酶（Cre 向量：sc-418923）去除选择标记。
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：NF-L: sc-20012，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
NF-L CRISPR/Cas9 KO质粒 (h) | sc-402254 | 20 µg | CNY2986.00 |
概述
NEFL 编码神经丝轻链（NF-L），这是一种核心的中间丝蛋白，可与 NEFM 和 NEFH 组装形成神经元细胞骨架，从而维持轴突直径及其机械稳定性。NF-L 参与神经丝的运输与组织，影响轴突内运输、细胞骨架动态以及神经元的远距离连接。NEFL 功能受损会扰乱神经丝装配和轴突完整性，使细胞骨架应激相关通路与进行性神经元功能障碍相关联。NEFL 变异及 NF-L 稳态异常与遗传性神经病变和神经退行性过程有关，在这些情况下轴突结构与轴突运输受损。
NF-L CRISPR/Cas9 KO质粒（h）是一组旨在针对性地破坏human细胞系中NEFL基因的质粒池。每条质粒均共表达一种独特的单引导RNA（sgRNA），该sgRNA针对NEFL基因内的特定位点，并携带来自化脓性链球菌的Cas9核酸酶。这些质粒还编码GFP，可通过荧光显微镜或流式细胞术对成功转染的细胞进行荧光标记和富集。
多引导设计提高了在Cas9介导的双链断裂形成后，产生破坏NEFL开放阅读框的插入或缺失（indels）的概率。CRISPR/Cas9系统引入的DNA断裂通过内源性非同源末端连接（NHEJ）途径修复，通常会导致移码突变，从而使NF-L蛋白表达失活。
该CRISPR敲除系统能够高效构建NEFL缺失的细胞模型，用于NF-L信号传导研究、功能基因组学研究、癌症生物学研究以及人类细胞系中治疗反应的评估。
主要特点
- 针对对 NF-L 功能至关重要的 NEFL 外显子的 sgRNA
通过单质粒共表达 SpCas9 和 sgRNA 以简化递送过程
GFP 报告基因用于识别转染细胞
针对多个 NEFL 基因组位点的质粒池以提高敲除效率
兼容转染递送
设计变体
CRISPRs +/- HDR
- 由 NF-L CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h) 和 NF-L CRISPR/Cas9 KO 质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别靶向 NEFL 基因座内的不同位点。可能提供其中一种或两种靶向设计。具体供应情况请参见相关产品。
由 NF-L HDR 质粒（h）编码的 HDR 供体构建体以及 NF-L HDR质粒（h2）编码的HDR供体构建体包含一个嘌呤霉素抗性盒和一个RFP报告基因，其两侧由NEFL同源臂包围，以支持在与CRISPR/Cas9敲除设计对应的特定NEFL靶位点进行同源导向修复。HDR供体的供应情况可能有所不同。请查看“相关产品”了解供应情况。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。