NEIL2CRISPR激活质粒(h): sc-408091-ACT

NEIL2（endonuclease VIII-like 2，类似内切核酸酶VIII的2）是一种 DNA 糖基化酶/AP 裂解酶，通过识别并切除氧化性 DNA 损伤来启动碱基切除修复（BER），这些损伤包括发生在单链 DNA、与转录相关的 DNA，以及复制中的 DNA 上的损伤。NEIL2 将损伤识别与DNA链切口形成相耦联，从而帮助维持基因组稳定性，并在氧化应激条件下调控转录保真性；其功能上与 APEX1、POLB、XRCC1 等 BER 因子以及下游连接步骤相互衔接。NEIL2 的活性与细胞对活性氧（ROS）和炎症的反应相关，而这些过程在多种生物学情境中塑造突变负担与应激信号传导。涉及 NEIL2 的氧化性 DNA 修复能力失衡，已在与癌症相关的基因组不稳定性及慢性炎症性疾病机制研究中受到关注，支持其在 DNA 损伤生物学中的重要性。

NEIL2 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性NEIL2的表达。

NEIL2 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的NEIL2基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于NEIL2转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性NEIL2表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的NEIL2位点，并能够研究内源性位点上依赖于NEIL2的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在NEIL2表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟NEIL2通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。