NCCTCRISPR激活质粒(h): sc-402965-ACT
- 针对种属：human
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- NCCT CRISPER激活质粒（h）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- NCCT CRISPR 激活质粒 (h)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 NCCT CRISPR 激活质粒 (h) 和 NCCT CRISPR 激活质粒 (h2) 编码的 gRNA 分别针对 SLC12A3 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
NCCTCRISPR激活质粒(h) | sc-402965-ACT | 20 µg | CNY2986.00 | |||
NCCTCRISPR激活质粒(h2) | sc-402965-ACT-2 | 20 µg | CNY2986.00 |
SLC12A3 编码 NCCT（NCC），这是一种电中性的 Na⁺/Cl⁻ 同向转运体，定位于远曲小管上皮细胞的顶端膜，在此介导钠和氯的重吸收，并参与电解质稳态与血压调控。NCCT 的活性与肾脏盐处理网络相整合，该网络涉及 WNK–SPAK/OSR1 激酶信号通路，可调控转运体的磷酸化、转运（trafficking）及其在细胞膜上的丰度。SLC12A3 的遗传变异或表达改变与遗传性失盐性肾小管病（如 Gitelman 综合征）相关，也被用于研究高血压易感性以及肾脏电解质表型。作为一种肾脏富集表达的转运体，NCCT 为在人类模型系统中研究上皮离子转运、细胞极性以及渗透压调控信号提供了一个便于操作的关键节点。
NCCT CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC12A3的表达。
NCCT CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SLC12A3基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SLC12A3转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性NCCT表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SLC12A3位点，并能够研究内源性位点上依赖于NCCT的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC12A3表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟NCCT通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。