NBC4CRISPR激活质粒(h): sc-412900-ACT

人类 SLC4A5 基因编码电中性的钠-碳酸氢盐共转运体 NBC4，这是一种膜转运蛋白，介导与 Na⁺ 偶联的 HCO₃⁻ 通量，以支持细胞内 pH 调控、碳酸氢盐稳态以及上皮离子转运。通过塑造细胞质缓冲能力并调控跨上皮的碳酸氢盐转运，NBC4 参与肾脏和肠道的电解质处理以及细胞对酸碱应激的反应等过程。SLC4A5 活性改变已被用于研究离子转运失衡以及 pH 依赖性信号转导的紊乱，这些变化可影响细胞兴奋性、代谢与组织稳态。这些特性使 SLC4A5 成为研究溶质载体（SLC）生物学、膜转运能量学以及与 pH 相关的调控通路的有用靶点。

NBC4 CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SLC4A5的表达。

NBC4 CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的SLC4A5基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于SLC4A5转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性NBC4表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的SLC4A5位点，并能够研究内源性位点上依赖于NBC4的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SLC4A5表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟NBC4通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。